酶学及其研究技术

第一章 概论
第一节 酶的概念和酶学研究的重要性
一、酶是什么
二、酶学研究的重要性
三、酶学研究历史
四、现代酶学概况
第二节 酶的组成及结构特点
一、酶的化学本质
二、酶蛋白亚基数的组成特点分类
三、酶的组成分类
四、酶的辅助因子
第三节 酶的分类与命名
一、习惯命名法
二、国际系统命名法
三、国际系统分类法
第四节 酶作为催化剂的特点
一、酶与一般催化剂比较的共性
二、酶作为催化剂的显著特性
第五节 酶的专一性
一、酶的专一性分类
二、几种蛋白酶的专一性
第二章 酶的分离纯化
第一节 酶分离纯化的一般原则
一、确立酶活力测定方法
二、原材料的选择与处理
三、酶的纯化方法
四、酶的纯度鉴定
第二节 酶的提取
一、生物材料的破碎
二、酶的抽提
第三节 酶的纯化
一、沉淀法
二、离子交换柱层析技术
三、凝胶过滤柱层析法
四、亲和层析
五、其他分离纯化方法
六、酶纯化方法的选择与实验设计
第三节 酶活力的测定
一、酶活力测定的一般原则
二、初速度
三、酶活力单位
四、酶活力测定的主要方法
第四节 酶制剂的浓缩、干燥及保存
一、浓缩的主要方法
二、保存
第五节 酶纯度的鉴定技术
一、酶纯度的评价
二、电泳法
三、其他方法
第六节 酶的分离纯化应用实例
一、青蟹碱性磷酸酶
二、南美白对虾N一乙酰J3一D一氨基葡萄糖苷酶
第三章 酶的理化性质研究
第一节 酶亚基数及分子量的测定
一、酶蛋白亚基数及亚基分子量的测定原理与方法
二、酶蛋白总分子量的测定原理与方法
第二节 酶的等电点测定
一、等电点测定的原理
二、等电聚焦电泳技术
第三节 酶的氨基酸组成
一、氨基酸组成分析
二、特殊氨基酸含量的测定
三、酰胺含量的测定
第四节 糖基酶中糖的组成与连接方式的研究
一、糖蛋白的分析
二、糖蛋白中糖成分的分析
三、糖基连接方式的研究
第五节 几种海洋动物酶的理化性质的研究实例
一、锯缘青蟹碱性磷酸酶的理化性质研究
二、南美白对虾N一乙酰一J3一D一氨基葡萄糖苷酶的理化性质研究
第四章 酶催化的动力学性质研究
第一节 酶促反应的基本动力学
一、Michaelis—Menten方程的建立
二、Briggs—Haldane修正的Michaelis—Menten方程
三、关于Michaelis一Menten方程的讨论
四、米氏常数Km的意义
五、米氏常数Km和最大反应速度Vm的图解法测定
六、米氏方程的积分形式
第二节 King—Altman方法推导速度方程
一、用稳态法推导动力学方程的基本步骤
二、King—Altman图像法推导动力学方程
三、wang和Hanes结构法则
第三节 酶浓度对反应速度的影响
第四节 产物浓度对酶促反应的影响
一、产物对酶初速度的影响的动力学
二、可逆反应的Haldane关系式
第五节 高底物浓度对酶活力的影响
一、动力学模型建立
二、动力学方程的推导
第五章 酶的抑制剂
第一节 酶抑制剂的类型
一、酶抑制剂两大类型
二、区别可逆抑制剂与不可逆抑制剂的实验设计与操作
第二节 不可逆的抑制剂
一、非专一性的不可逆抑制剂
二、专一性不可逆抑制剂
第三节 可逆抑制剂作用的动力学
一、竞争性抑制作用的动力学
二、非竞争性抑制作用的动力学
三、反竞争性抑制作用的动力学
四、混合型抑制作用的动力学
第六章 pH对酶活力的影响
第一节 pH对酶催化的效应
一、酶促反应的最适pH
二、酶的pH稳定性
第二节 pH对酶可逆作用的动力学
一、酶活性中心可解离基团的解离常数
二、pH影响酶活性中心解离基团的动力学模型的建立
三、酶活性中心解离基团的解离常数的测定
第三节 有机溶剂对酶活性中心解离基团的微扰作用
第四节 pH对酶效应研究的实例
一、pH对青蟹碱性磷酸酶（ALPase）催化pNPP水解反应的效应
二、酶活性中心解离基团解离常数的测定
第七章 温度对酶活力的影响
第一节 温度对酶催化反应的影响
一、酶促反应的最适温度
二、酶的热稳定性
第二节 温度对酶催化反应速度常数的影响
一、温度与速度常数
二、酶促反应的热力学参数的测定
第三节 温度对酶催化反应速度常数的影响
一、酶活性中心解离基团的标准热焓
二、酶促反应的热力学常数测定实例
三、酶活性中心解离基团的解离热焓测定实例
第四节 酶的热失活动力学
一、经典的酶热失活研究方法
二、酶失活过程中的底物反应动力学方法
三、酶的热失活表观速度常数的测定
四、酶热失活的微观速度常数的测定
第八章 酶的多底物动力学
第一节 术语
一、多底物催化反应历程的Cleland表示法
二、多底物反应的酶中间物
三、多底物反应历程的分类
四、多底物反应的动力学参数表示法
五、多底物反应机理的图形表示法
第二节 OrderedBiBi机理
一、反应模型的Clleland表示法
二、动力学方程的推导（King—Altman推导法）
三、反应速度方程用动力学常数表示的基本方法
四、作图法求解动力学参数
第三节 RandomBiBi机理
第四节 PingPongBiBi机理
第五节 多底物反应机理的判断
第六节 产物的抑制作用机理的判断
一、有序双双反应（OrderedBiBi）的产物抑制作用的判断
二、乒乓双双反应（PingPongBiBi）的产物抑制作用的判断
三、Cleland的产物抑制作用的判断规则
第九章 酶功能基团的化学修饰
第一节 化学修饰的原理
一、影响酶的功能基团反应活性的主要因素
二、修饰剂反应性的决定因素
第二节 采用非特异性试剂对酶功能基团进行修饰
一、特殊氨基酸残基的化学修饰
二、修饰剂和修饰反应条件的选择
第三节 亲和标记和差示标记
一、亲和标记法的原理
二、差示标记法的原理
第四节 酶活性中心必需基团数的测定
一、酶修饰失活动力学
二、酶修饰失活速度常数比较法判断必需基团数（Ray—Koshland方法）
三、邹氏图解法求必需基团数
第十章 酶的分子结构基础及催化作用机理
第十一章 酶抑制剂的设计与应用
第十二章 酶分子构象的研究技术
第十三章 多酶体系及调节酶
第十四章 酶活性调控