天正十年（1582），信长消灭了甲斐武田氏。泷川一益受信长的派遣来到上野，成为织田军在关东地区的统帅，并出任关东管领。北条氏政为不得罪强大的织田势力，小心翼翼地处理着和泷川一益的关系。是年五月，泷川一益把居城移到厩桥城，就近控制关东各大名。然而，同年六月，本能寺之变的发生又一次改变了关东的局势。由于信长的死亡，导致织田家原本的统一体系崩溃。北条氏政也开始对抗泷川一益在关东的权威。

本能寺的消息传到关东，泷川一益立刻决定回师讨伐明智，事实上也颇有一番争夺天下的心思。但是，泷川一益的希望很快就被一个消息所打破--北条家入侵上野！

六月，北条军以北条氏直为总大将，出兵将近6万，杀入上野。泷川一益则集合上野地方豪族所组成的上野众以及织田帐下的关东大名约两万人，双方在神流川爆发了著名的神流川合战。

战役开始，六月十八日，作为织田家名将的泷川一益为抢占战略要地，全力进攻武藏与上野交界的金城。泷川一益的攻势十分迅猛，引起了北条方面的注意。占有兵力优势的北条家立刻向神流川桥方向移动，援助金城，在桥上，与泷川一益所率领的军队遭遇。泷川一益是泷川一族中著名的猛将，类似于三国演义中张飞一类的人物。狭路相逢勇者胜。在他的率领下，泷川军获得了对抗北条军的初步胜利，北条军的先锋北条氏邦逃离战场。同日，金城也落入泷川家之手。泷川一益初战告捷。

此时，北条氏直率领主力部队赶到战场，接应了战败的北条氏邦。由于北条军比泷川军兵力高出三倍，于是战场的天平开始向北条一方倾斜。第二日，北条军与泷川一益再战神流川南岸。先一日的败军之将北条氏邦仍然担任先锋，率军直冲泷川军，双方在接触后就陷入拉锯战状态，北条氏邦虚晃一枪，下令撤退，北条军的撤退麻痹了泷川一益，这个非常明显的诱敌战术使一代名将泷川一益做出了错误的战场判断。他下令咬住北条氏邦，于是，泷川军陷入了北条军的重围之中。作为预备队伍的北条氏直下令先冲泷川军两翼的上野众。战斗力相对较低的上野众很快崩溃，泷川一益的本阵陷入了孤军奋战的境地。在以寡敌众的情况下，泷川军损失惨重，泷川一益在家臣的保护下得以脱离战场。在这一战以后，泷川一益退出上野，逃往伊势，他本人因此在织田家的地位一落千丈，也失去了在信长死后争夺天下的资格。

泷川一益的退出使原本的甲斐武田氏领地处于真空状态。于是，在信长死后野心勃勃的德川家康、越后的上杉景胜和力图称霸关东的北条家都希望能入主这一真空地带。北条家最初与越后上杉景胜在川中岛对峙，为防止德川、上杉双方夹击，北条氏政作出让步，出让北信浓四郡，双方达成了和解协议，这使北条能腾出手来对付德川。八月，北条军侵入甲斐，被德川方的鸟居元忠和三宅康贞率2000人击退，北条军损失300余人。这场黑驹合战揭开了天正壬午之乱的序幕。战局很快就向不利于北条家的情形发展。原本配合北条家的木曾义昌被德川家说服加入德川一方。到九月，双方达成协议，北条氏直娶德川家康之女督姬；甲斐与信浓归属家康，而上野归属北条家。天正壬午之乱以双方的妥协宣告结束。

此时的北条家已经达到了势力的最高峰，除了原有的相模、伊豆、武藏以外，北条陆陆续续获得了下总、上总以及上野、常陆和下野的部分地区，领地达到240万石，成为关东的巨无霸级大名。天正十三年（1585），北条家又联合那须氏侵入下野，攻克长沼城，下野的大部分区域被北条支配。

不过，这已经是北条家最后的辉煌了。在北条步入辉煌的同时，丰臣秀吉逐渐掌握了日本政局，成为“天下人”。天正十六年（1588），丰臣秀吉要求北条氏政和氏直父子列席聚乐第，遭到了北条方面的拒绝。作为天下人的丰臣自然不能容忍日本有人能挑战他的权威，于是，北条与丰臣之间的关系开始出现裂痕。而第二年的名胡桃城事件则成为北条家灭亡的导火线。